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细胞异常形态大盘点

点击次数:98   发布时间:2024/6/18 11:39:02

在这个看脸的里,连细胞都不例外。细胞养得好看,也说明了细胞状态很好。细胞培养是一段漫长的旅程,而在旅途中随着时间推移,细胞的外观可能会发生一些变化,比如变大、变小、聚团、空泡等等。这些变化可能是正常现象,也可能是状态不好的细胞在向我们发出求救信号。

那么细胞形态发生异常变化,是什么原因导致的,该如何处理呢?小尚这就带大家一探究竟~

 

1. 细胞聚团

 

有一些单层贴壁生长的细胞,在遇到低温环境、剧烈震荡、血清不合适的时候容易发生聚团,如GL261、C4-2、SH-SY5Y等。一般来说,重新消化接种就能恢复正常单层贴壁。使用多聚赖氨酸或明胶包被培养器皿,也可以有效促进细胞单层贴壁,预防聚团发生。

 

1. 左:GL261细胞发生聚团 右:GL261正常单层贴壁

 

消化时间不足导致细胞没有消化开,细胞也可能抱团贴壁。继续培养至24小时,待细胞状态稳定后,重新进行消化接种就行啦。下次消化可以适当延长消化时间记得接种后在显微镜下看一看细胞是不是已经分散成单细胞了,确保万无一失

 

细胞在长满后不传代,长时间维持高密度培养,也可能会形成非常致密的细胞团,这种细胞团不容易清除,传代之后还会出现。所以咱们在培养细胞的时候要密切关注细胞密度,除非实验要求细胞铺满,一般到80%左右汇合度就要传代了,可不能偷懒哦。

 

注意!有些细胞天生就是聚团生长(NK-92、Jurkat等),可别当作异常状态误伤了友军。

 

 

2. 细胞皱缩

 

贴壁弱的细胞(如293系列细胞系)不能牢牢地“扒住”培养瓶,遇到震荡会缩起来;它们也非常怕冷,碰到低温环境“缩成一团”。此时只需放回培养箱静置一段时间细胞就可以恢复正常。当然,如果静置过夜了细胞还是皱缩状态,就需要重新消化一下啦。

 

  

2. 左:受到震荡的SH-SY5Y细胞 右:静置后恢复正常贴壁形态

 

 

所以在培养贴壁较弱的细胞时,要悉心呵护,轻拿轻放。不在室温下放置太长时间,换液或传代,一定要37℃预热培养基和PBS预防细胞脱落。 

 

多聚赖氨酸或明胶包被培养器皿可以增强吸附性,在培养贴壁较弱的细胞时可以酌情使用。

 

 

3. 细胞空泡

细胞出现空泡,通常是细胞受到压力的体现。损伤,药物刺激,培养基成分不对,培养温度、气相等不合适都可能导致空泡。去掉压力来源,可减少空泡产生。平时培养时建议添加足量的培养基,及时换液、传代,可别让细胞饿着啦!在进行吹打等操作时动作尽量轻柔,避免损伤。

 

3. 左:培养基成分不适宜导致细胞产生空泡 右:优化培养基成分后空泡减少

 

 

有的细胞含有的空泡是正常的膜泡活动,可查看ATCC、DSMZ、ECACC等细胞库提供的细胞照片确认细胞空泡是否属于正常情况。

 

 

4. 细胞变细拉丝

细胞大量变细、拉丝,同时伴随着生长变慢(甚至停止生长)、漂浮细胞多、细胞间连接减少等不正常的现象,说明细胞受到了损伤,可以尝试增加血清比例(zui不超过20%)调整细胞状态。要好好回忆一下,究竟是哪一步操作损伤了细胞,避免下次培养出现同样的问题。

  

4 左:正常Hepa1-6细胞 右:受损的Hepa1-6细胞

 

同样,细胞拉丝并不一定是细胞状态差,看到视野中有几个细胞拉丝不要紧张,细胞分裂时会伸出细丝辅助贴壁,而有的细胞类型自带细丝(如神经元),要结合细胞特性、生长速度等多方面来看哦。

 

6. 细胞衰老

 

原代培养的细胞经过有限次数分裂后将发生复制衰老(replicative senescence),衰老细胞有两个标志性生物学特性:1. 细胞停止生长2. 衰老相关半乳糖苷酶(SA β-Gal)活化,用其底物进行染色即可识别衰老细胞(图5)。通常,衰老细胞在形态上变大,变得扁平,细胞间连接减少。

仍然需要注意有的细胞在低密度时也会呈现此形态,因而不能单从形态判断,还需结合上述生物学特性综合判断细胞是否衰老。

 

 

5. SA β-Gal染色(左:正常细胞 右:衰老细胞)[1]

 

所以,下次当你看到形态异常的细胞时,不妨想想它们本身应该具有怎样的特性,它们经历了怎样的危机才发生这种变化。对症下药,细胞就能越养越漂亮!

 

 

参考文献

 

1. Beck J, Horikawa I, Harris C. Cellular Senescence: Mechanisms, Morphology, and Mouse Models. Veterinary Pathology. 2020;57(6):747-757. doi:10.1177/0300985820943841

 

原创作者:武汉尚恩生物技术有限公司

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